Bước 1: Vào mẫu tạo vật liệu khởi đầu
Quả sau thụ phấn 9 - 12 tháng tiến hành thu hái, quả phải còn nguyên vẹn không bị nứt vỏ.
Rửa sạch quả dưới vòi nước sạch, dùng cồn 70 độ lau sạch vỏ. Tiếp tục khử trùng quả bằng dung dịch Johnson nồng độ 1% trong thời gian 15 - 20 phút.
Rửa lại quả 4 - 5 lần bằng nước cất vô trùng. Dùng dao bổ dọc quả, lấy nhíp gắp hạt cấy đều trên bề mặt môi trường nuôi cấy đã chuẩn bị sẵn.
Môi trường nuôi cấy: 2 g/l Hyponex + 100 ml nước dừa + 10 g/l đường + 5,5 g/l agar + 30 g/l khoai tây; pH = 5,6.
Sau khi gieo hạt trên môi trường nuôi cấy cần che tối 5 - 7 ngày đầu, sau đó chuyển dần sang điều kiện phòng nuôi cấy.
Bước 2: Nhân nhanh
Hạt gieo sau 40 ngày bắt đầu nảy mầm, sau 60 ngày bắt đầu hình thành thể tiền chồi (PLBs: Protocorm Like Bodies), PLBs phát triển từ hạt chưa trưởng thành.
Sau 3 - 4 tháng, cấy chuyển cây sang môi trường nhân nhanh đã chuẩn bị sẵn.
Giai đoại đầu tiên của quá trình nhân nhanh thực hiện cho 3 - 4 lần cấy chuyển (50 ngày/lần cấy chuyển)
Môi trường nuôi cấy: 2 g/l Hyponex + 1 mg BAP + 100 ml/l nước dừa + 20 g/l đường + 5,5 g/l agar ; pH=5,6.
Các lần cấy chuyển tiếp theo: 2 - 3 lần cấy chuyển, 50 ngày/lần cấy chuyển.
Sử dụng môi trường: 2 g/l Hyponex + 100 ml/l nước dừa + 30 g/l chuối tiêu + 40 g/l khoai tây + 0,3 g/l than hoạt tính +10 g/l đường + 5,5 g/l agar; pH=5,6.
Bước 3: Tạo cây hoàn chỉnh
Sau quá trình nhân nhanh và đạt được số lượng nhất định, chồi sẽ được chuyển sang môi trường tạo cây hoàn chỉnh.
Môi trường tạo cây hoàn chỉnh: 2 g/l Hyponex + 0,5 mg/l α NAA + 100 ml/l nước dừa + 50 g/l chuối tiêu + 10 g/l đường + 5,5 g/l agar + 1 g/l than hoạt tính; pH=5,6.