Bước 1: Vào mẫu tạo vật liệu khởi đầu
Lựa chọn mẫu:
Cây con 8 - 10 tháng tuổi, to khoẻ, không bị tổn thương cơ giới.
Khử trùng mẫu:
Rửa sạch mẫu dưới vòi nước chảy, dùng dao sắc cắt bỏ bớt lá, thành từng đoạn mẫu chứa đỉnh chồi dài 2 - 3 cm.
Ngâm mẫu trong dung dịch xà phòng loãng 15 phút, sau đó rửa lại thật sạch dưới vòi nước chảy.
Tráng lại bằng nước cất 2 lần.
Đưa mẫu vào bốc cấy, khử trùng bằng cồn 70o thời gian 30 giây, tráng qua 1 lần nước cất vô trùng.
Tiếp đến. khử trùng mẫu bằng dung dịch Jonhson (NADCC) 1% trong thời gian 15 phút, tráng lại bằng nước cất vô trùng 4 - 5 lần.
Đặt mẫu trên giấy thấm vô trùng, nhẹ nhàng tách bỏ từng lớp lá, để mẫu có kích thước 0,5 cm và cắm vào môi trường nuôi cấy.
Tạo vật liệu khởi đầu:
Sử dụng môi trường VW + 1,5 mg/l BAP
Bước 2: Giai đoạn nhân nhanh
Sau 2 tháng, khi đỉnh chồi phát triển thành chồi, tiến hành cấy chuyển sang môi trường nhân nhanh.
Môi trường nhân nhanh: KC + 2 mg/l BAP + 0,1 mg/l αNAA
Điều kiện phòng nuôi: Nhiệt độ: 25± 20C, Ánh sáng: 2000 lux, Thời gian chiếu sáng 10 h/ngày.
Định kỳ 45 ngày cấy chuyển một lần. Sau 4 - 5 vòng cấy chuyển trên môi trường nhân nhanh sẽ chuyển cây sang môi trường tiền ra rễ.
Bước 3: Giai đoạn tạo cây hoàn chỉnh
Sử dụng môi trường VW + 50 g/l chuối tiêu + 30 g/l khoai tây + 30 g/l cà rốt
Điều kiện phòng nuôi: Nhiệt độ: 25 ± 20C, Ánh sáng: 2500 - 3000 lux, Thời gian chiếu sáng 10 h/ngày.
Sau 1,5 - 2,0 tháng nuôi cấy, cây con có 3 - 4 lá, dài lá 5 - 6 cm, có 2 - 3 rễ.
